ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคพื้นฐานในชีววิทยาโมเลกุลทำให้การขยายของลำดับดีเอ็นเอเฉพาะ ความแม่นยำและความแม่นยำของการจ่ายน้ำยาเป็นสิ่งสำคัญสำหรับความสำเร็จของการทดลอง PCR ปิเปตอัตโนมัติหรือที่เรียกว่าปิเปตอัตโนมัติได้กลายเป็นเครื่องมือที่ขาดไม่ได้ในห้องปฏิบัติการเนื่องจากความสามารถในการส่งมอบของเหลวที่แม่นยำอย่างมีประสิทธิภาพ ในบล็อกนี้ในฐานะซัพพลายเออร์ปิเปตอัตโนมัติฉันจะสำรวจว่าปิเปตอัตโนมัติสามารถใช้สำหรับ PCR และหารือเกี่ยวกับปัจจัยที่ต้องพิจารณาหรือไม่
ความเหมาะสมของปิเปตอัตโนมัติสำหรับ PCR
ปิเปตอัตโนมัติได้รับการออกแบบมาเพื่อให้การจ่ายของเหลวที่ถูกต้องและทำซ้ำได้ซึ่งเป็นข้อกำหนดที่จำเป็นสำหรับ PCR ใน PCR แม้แต่การเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในปริมาณของรีเอเจนต์เช่นเทมเพลต DNA ไพรเมอร์นิวคลีโอไทด์และเอนไซม์อาจส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อประสิทธิภาพการขยายและคุณภาพของผลิตภัณฑ์ PCR ขั้นสุดท้าย ปิเปตอัตโนมัติสามารถลดความแปรปรวนเหล่านี้ได้โดยช่วยให้ผู้ใช้สามารถตั้งค่าปริมาณเฉพาะที่มีความแม่นยำสูง
ปิเปตอัตโนมัติที่ทันสมัยส่วนใหญ่เสนอช่วงเสียงที่ปรับได้ซึ่งสามารถปรับแต่งได้ตามข้อกำหนดเฉพาะของปฏิกิริยา PCR ตัวอย่างเช่นในปฏิกิริยา PCR ทั่วไปปริมาตรของเทมเพลต DNA อาจอยู่ในช่วงของไมโครลิตรสองสามตัวในขณะที่ปริมาตรของการผสมหลักที่มีนิวคลีโอไทด์บัฟเฟอร์และโพลีเมอเรสสามารถสูงถึง 20 - 50 ไมโครลิตร ปิเปตอัตโนมัติสามารถแจกจ่ายปริมาณที่แตกต่างกันเหล่านี้ได้อย่างแม่นยำเพื่อให้มั่นใจว่าส่วนประกอบของปฏิกิริยาจะอยู่ในสัดส่วนที่ถูกต้อง
ยิ่งไปกว่านั้นปิเปตอัตโนมัติยังมีคุณสมบัติที่เพิ่มความแม่นยำและความน่าเชื่อถือของการจ่ายของเหลว ปิเปตอัตโนมัติบางตัวใช้เทคโนโลยีลูกสูบขั้นสูงเพื่อให้แน่ใจว่าการส่งของเหลวที่สอดคล้องและแม่นยำ อื่น ๆ มีจอแสดงผลดิจิตอลที่อนุญาตให้ผู้ใช้ตั้งค่าและอ่านปริมาณที่ต้องการได้อย่างง่ายดายลดโอกาสของข้อผิดพลาดของมนุษย์ คุณสมบัติเหล่านี้ทำให้ปิเปตอัตโนมัติดี - เหมาะสำหรับงานที่แม่นยำและซ้ำซ้อนที่เกี่ยวข้องกับการตั้งค่า PCR
ปัจจัยที่ต้องพิจารณาเมื่อใช้ปิเปตอัตโนมัติสำหรับ PCR
1. ความแม่นยำและความแม่นยำ
ความแม่นยำของปิเปตอัตโนมัติหมายถึงปริมาณที่ใกล้เคียงกับปริมาณที่เพิ่มขึ้นของปริมาณที่ตั้งไว้ในขณะที่ความแม่นยำหมายถึงความสามารถในการทำซ้ำของปริมาณที่จ่าย สำหรับ PCR ความแม่นยำสูงและความแม่นยำเป็นสิ่งจำเป็น ขอแนะนำให้เลือกปิเปตอัตโนมัติที่มีความแม่นยำในระดับสูงโดยทั่วไปภายใน± 1 - 2% ของปริมาณที่ตั้งไว้และค่าสัมประสิทธิ์การเปลี่ยนแปลง (CV) น้อยกว่า 1% สำหรับความแม่นยำ การสอบเทียบปิเปตอัตโนมัติเป็นสิ่งจำเป็นในการรักษาความแม่นยำและความแม่นยำในช่วงเวลาหนึ่ง
2. การฆ่าเชื้อ
PCR เป็นเทคนิคที่มีความอ่อนไหวสูงและการปนเปื้อนสามารถนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ผิดพลาด - บวก เมื่อใช้ปิเปตอัตโนมัติสำหรับ PCR มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องแน่ใจว่าปิเปตนั้นปลอดเชื้อ ปิเปตอัตโนมัติบางตัวมาพร้อมกับเคล็ดลับที่ใช้แล้วทิ้งซึ่งสามารถแทนที่ได้อย่างง่ายดายระหว่างตัวอย่างหรือรีเอเจนต์ที่แตกต่างกันลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนข้าม นอกจากนี้ปิเปตเองควรได้รับการทำความสะอาดและฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอโดยเฉพาะอย่างยิ่งหากใช้สำหรับการจัดการตัวอย่างประเภทต่างๆ
3. ช่วงเสียง
ดังที่ได้กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ปฏิกิริยาของ PCR เกี่ยวข้องกับการจ่ายเงินของรีเอเจนต์ต่าง ๆ มันเป็นสิ่งสำคัญในการเลือกปิเปตอัตโนมัติที่มีช่วงเสียงที่สามารถครอบคลุมปริมาณที่ต้องการทั้งหมดสำหรับการตั้งค่า PCR ตัวอย่างเช่นปิเปตอัตโนมัติหลายช่องสัญญาณที่มีช่วงเสียง 0.5 - 10 μlสามารถใช้สำหรับการจ่ายไพรเมอร์ปริมาณเล็กน้อยในขณะที่ปิเปตอัตโนมัติช่องทางเดียวที่มีช่วง 20 - 200 ไมโครลิตรสามารถใช้สำหรับการจ่ายมิกซ์ขนาดใหญ่ขนาดใหญ่
4. ความเข้ากันได้กับรีเอเจนต์ PCR
รีเอเจนต์ PCR บางตัวเช่นวิธีแก้ปัญหาที่มีความหนืดสูงหรือที่มีผงซักฟอกอาจต้องพิจารณาเป็นพิเศษเมื่อใช้ปิเปตอัตโนมัติ การแก้ปัญหาความหนืดอาจไม่สามารถจ่ายได้อย่างถูกต้องด้วยเคล็ดลับปิเปตมาตรฐานและในกรณีเช่นนี้เคล็ดลับหรือปิเปตพิเศษที่ออกแบบมาสำหรับของเหลวที่มีความหนืดอาจจำเป็น นอกจากนี้รีเอเจนต์บางตัวอาจโต้ตอบกับวัสดุของเคล็ดลับปิเปตหรือปิเปตเองซึ่งอาจส่งผลต่อความแม่นยำของการจ่ายหรือปนเปื้อนรีเอเจนต์ มันเป็นสิ่งสำคัญในการเลือกปิเปตอัตโนมัติและเคล็ดลับที่เข้ากันได้กับรีเอเจนต์ PCR เฉพาะที่ใช้
บทบาทของปิเปตอัตโนมัติในเวิร์กโฟลว์ PCR
ปิเปตอัตโนมัติมีบทบาทสำคัญในทุกขั้นตอนของเวิร์กโฟลว์ PCR ในขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างจะใช้ปิเปตอัตโนมัติเพื่อถ่ายโอนเทมเพลต DNA จากหลอดเก็บไปยังหลอดปฏิกิริยา PCR การจ่ายเทมเพลต DNA ที่แม่นยำเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อให้แน่ใจว่าปริมาณ DNA ที่ถูกต้องมีอยู่ในปฏิกิริยาซึ่งอาจส่งผลกระทบต่อประสิทธิภาพการขยายและผลผลิตของผลิตภัณฑ์ PCR
ในระหว่างการเตรียมการผสมหลักจะใช้ปิเปตอัตโนมัติเพื่อรวมส่วนประกอบต่าง ๆ เช่นนิวคลีโอไทด์บัฟเฟอร์และโพลีเมอเรส การจ่ายส่วนประกอบเหล่านี้อย่างแม่นยำเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อรักษาเงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยาที่ดีที่สุดสำหรับ PCR เมื่อเตรียมการผสมหลักแล้วปิเปตอัตโนมัติจะถูกใช้เพื่อแจกจ่ายเข้าไปในหลอดปฏิกิริยา PCR ที่มีเทมเพลตดีเอ็นเอ
ในแอพพลิเคชั่น PCR ที่มีปริมาณสูง - มัลติ - ช่องสัญญาณอัตโนมัติมีประโยชน์อย่างยิ่ง พวกเขาสามารถแจกจ่ายของเหลวปริมาณเท่ากันในหลายหลุมของแผ่น PCR ซึ่งช่วยลดเวลาและความพยายามที่จำเป็นสำหรับการตั้งค่าตัวอย่างได้อย่างมีนัยสำคัญ สิ่งนี้ไม่เพียงเพิ่มประสิทธิภาพของเวิร์กโฟลว์ PCR แต่ยังช่วยลดโอกาสของข้อผิดพลาดของมนุษย์ที่เกี่ยวข้องกับการปิเปตซ้ำ ๆ
อุปกรณ์ห้องปฏิบัติการที่เกี่ยวข้อง
นอกจากปิเปตอัตโนมัติแล้วอุปกรณ์ห้องปฏิบัติการอื่น ๆ ก็มีความสำคัญสำหรับการทดลอง PCR ตัวอย่างเช่นไฟล์ความสมดุลความแม่นยำทางอิเล็กทรอนิกส์ใช้เพื่อชั่งน้ำหนักรีเอเจนต์ที่เป็นของแข็งเช่นไพรเมอร์และนิวคลีโอไทด์ก่อนที่จะละลายในสารละลาย อันเครื่องวิเคราะห์ความสมดุลของความชื้นสามารถใช้เพื่อกำหนดปริมาณความชื้นของรีเอเจนต์ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการรับรองความถูกต้องของส่วนประกอบปฏิกิริยา อันเครื่องกวนแม่เหล็กสามารถใช้เพื่อผสมรีเอเจนต์ PCR อย่างละเอียดเพื่อให้มั่นใจว่าส่วนประกอบทั้งหมดจะกระจายอย่างสม่ำเสมอ
บทสรุป
โดยสรุปแล้วปิเปตอัตโนมัติสามารถนำมาใช้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับ PCR เนื่องจากความสามารถในการจ่ายของเหลวที่ถูกต้องและทำซ้ำได้ อย่างไรก็ตามมีหลายปัจจัยเช่นความแม่นยำความแม่นยำการฆ่าเชื้อช่วงเสียงและความเข้ากันได้กับรีเอเจนต์ PCR จะต้องได้รับการพิจารณาเมื่อใช้ปิเปตอัตโนมัติสำหรับ PCR ด้วยการเลือกปิเปตอัตโนมัติที่เหมาะสมและทำตามเทคนิคการปิเปตที่เหมาะสมผู้ใช้สามารถมั่นใจได้ถึงความสำเร็จของการทดลอง PCR
หากคุณกำลังมองหาปิเปตอัตโนมัติคุณภาพสูงสำหรับแอปพลิเคชัน PCR ของคุณเราพร้อมให้ความช่วยเหลือ บริษัท ของเรานำเสนอปิเปตอัตโนมัติที่หลากหลายพร้อมช่วงปริมาณที่แตกต่างกันคุณสมบัติและจุดราคาเพื่อตอบสนองความต้องการเฉพาะของคุณ ไม่ว่าคุณจะเป็นห้องปฏิบัติการวิจัยขนาดเล็กหรือสถานที่วินิจฉัยขนาดใหญ่เราสามารถให้บริการโซลูชั่นที่ดีที่สุดสำหรับข้อกำหนดการปิเปต PCR ของคุณ ติดต่อเราวันนี้เพื่อเริ่มการอภิปรายเกี่ยวกับความต้องการการจัดซื้อของคุณและค้นหาปิเปตอัตโนมัติที่เหมาะสมที่สุดสำหรับห้องปฏิบัติการของคุณ
การอ้างอิง
- Sambrook, J. , & Russell, DW (2001) การโคลนนิ่งโมเลกุล: คู่มือห้องปฏิบัติการ (3rd ed.) สำนักพิมพ์ห้องปฏิบัติการ Cold Spring Harbour
- Dieffenbach, CW, & Dveksler, GS (2003) ไพรเมอร์ PCR: คู่มือห้องปฏิบัติการ (2nd ed.) สำนักพิมพ์ห้องปฏิบัติการ Cold Spring Harbour
- Van Pelt - Cornelis, C. (2001) Pipetting: คู่มือที่ใช้งานได้จริง Eppendorf AG